PCR实验室是分子诊断的基础,也是进行PCR实验的场所。近些年,分子诊断行业快速发展,使得很多IVD从业者对PCR的认识又进入到了一个新的阶段,但是基于实验室的基本知识仍然是非常重要的一环。
PCR实验室的设计原则
原则上应当设置4个区域: 试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。
根据使用仪器的功能,区域可适当合并。
使用实时荧光PCR仪,扩增区、扩增产物分析区可合并;
采用样本处理、酸核提取及扩增检测为一体的自动化,则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。
各区功能物品清单:
试剂储存和准备区(1区)
功能:贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备,以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
物品:
2~8℃和-20℃以下冰箱。
混匀器:微量加样器(覆盖0.2-1000μl)
PCR实验室工作基本原则:
1.进入各工作区域应当严格按照 单一方向进行
试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→ 扩增产物分析区。
2.各工作区域必须有 明确的标记,不同工作区域内的设备、物品不得混用。
3. 不同的工作区域使用不同的工作服(例如不同的颜色)。工作人员离开各工作区域时,不得将工作服带出。
4.实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应当 有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
5.工作结束后,必须 立即对工作区进行清洁。工作区的实验台表面应当可耐受诸如次化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的紫外照射应当方便有效。
由于紫外照射的距离和能量对去污染的效果非常关键,因此可使用可移动紫外灯(254nm波长),在工作完成后调至实验台上 60~90cm内照射。
由于扩增产物仅几百或几十碱基对(bp),对紫外线损伤不敏感,因此紫外照射扩增片段必须延长照射时间,是照射。