电穿孔法：基本原理

　　电穿孔法要用到一种称为电转化仪的特殊设备。通常将细胞放在电击杯中，电击杯的两边有电极，这样插入到仪器中后会与之有电流通路。

　　将细菌细胞与DNA混合后上样到电击杯中，并在几微秒时间内施加1000伏到10000伏的电场。这样会在膜两边造成0.5到1伏的电压，据信这会使得的磷脂双层重新排列，从而形成小孔。处于这个状态时，质粒DNA就能穿过膜。电脉冲停止后，膜将自身得到恢复。

　　细菌摄入质粒后，就可在含抗生素的琼脂糖培养板上生长。

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　　接下来，在冰上化冻清洗过的电转化感受态细胞。向细胞中加入1-5微升1ng/μl冷却的不含盐离子的质粒溶液，轻轻混匀，再将混合物加入到冷却的电击杯中。要保证没有任何气泡产生。

　　针对您用的细胞类型在电转化仪上设定正确的电压和电场强度。这里您看到这个电转化仪被设置到了1700伏，产生的电场为17kV/cm。

　　将电击杯的表面擦干然后放到电转化仪中。用脉冲电击细胞直到您听到一声嘀声。电击脉冲失败会导致电流泄漏，这时会有可见的火花并听到爆破声。这种泄漏，被称为电弧，是由于感受态细胞或DNA中含有过多盐分造成的。

　　转化是否成功可以通过观察时间参数来预测，它是在施加脉冲后电压消失用到的时间。如果有盐分存在，电穿孔溶液有强导电性，电压就会消失很快，造成泄漏，从而很多细胞。对细菌而言，较好的时间常量为5-10毫秒。

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