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人ATP酶ATPaseELISA试剂盒操作步骤

关键词:人ATP酶ATPaseELISA试剂盒

详细信息

人ATP酶ATPaseELISA试剂盒操作步骤

  性状:盒装液体

  贮藏条件:2-8℃低温保存

  有效期:6个月

  注意要点:请仔细阅读产品的详细使用说明,严格遵照规定操作,必能得出准确的结果。

  用途:科研与实验专用试剂,不得用于临床诊断。

  特异性:同时检测天然或重组的,且与其他相关蛋白无交叉反应。

  检测种属:人、大小鼠、兔、羊、猴、猪、豚鼠ELISA检测试剂盒等种属。

  适用范围:此试剂盒仅用于科研实验,禁用于临床

  标本:血清、、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。

  运输方面:现货供应,一般为快递运输,江浙沪隔天到,外地及偏远地方三至五天时间到货

  ELISA常用的方法:双抗体夹心法、间接法、竞争法以及BAS-ELISA等。

  服务承诺:工作时间内免费技术咨询和指导,提供来样检测及免费代测服务,保证实验结果的有效性。

  研究领域:炎症研究、生物学、研究、新陈代谢、信号通路、免疫学、传染病、其他研究。

  免费代测,从标本收集、保存、预试验、实验、数据分析等全实验过程提供完整的技术指导。

人ATP酶ATPaseELISA试剂盒操作步骤

  1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过一夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。zui后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

  4. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  注:标本溶血会影响zui后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

  1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

  2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

  3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

  4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

  5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

  6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

  7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

  精密度:

  精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV(%)=SD/mean×100

  批内差:取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定20次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。

  批间差:选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定,每个样本使用同一试剂盒重复测定8次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。

  批内差: CVlt;10% Inter-批间差: CVlt;13%

  稳定性:

  经测定,试剂盒在有效期内按推荐温度保存,其活性降低率小于5%。

  为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响,实验室的环境条件需尽量保持一致,尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

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